Хемоглобин

Методи за измерване на хемоглобина в кръвта

Приема се, че Н. Welker през 1854 г. е предложил първия метод за определяне на хемоглобин, при който цветът на капка кръв върху филтърна хартия се сравнява с цветни хартиени стандарти. Т.W. Tallquist през 1900 г. е модифицирал този метод.

Съществуват няколко групи методи за измерване на хемоглобина:

1. Колориметрични методи. Хемоглобинът се измерва като:
   • кисел или алкален хематин;
   • карбоксихемоглобин;
   • оксихемоглобин;
   • азид-MetHb;
   • хемиглобинцианид.
2. Газометрични методи. Измерва се капацитетът на хемоглобина да свързва кислород (O₂). При пълно насищане 1 g Hb свързва 1.34 ml О₂. Измерва се обемът на свързания газ, чрез което се определя концентрацията на хемоглобина въз основа на посочения капацитет на свързване. Когато се използва кислород, се определя функционално активният хемоглобин и резултатите са с около 2% по-ниски в сравнение с други методи. Тривалентното желязо на метхемоглобина не свързва кислород, поради което тази фракция остава недостъпна за измерването. Методът е неприложим за текуща диагностика.
3. Ферометричен (химически) метод. Методът се основава на измерване съдържанието на желязо в хемоглобина въз основа на зависимостта: 100 g Hb ≡ 0.347 g Fe. Съдържанието на желязо може да се определи надеждно със спектрофотометричен метод или с рентгеново-емисионна спектрометрия. Методът е трудоемък, освен това се отчита и желязото, свързано с неактивни производни. Методът е неприложим за текуща диагностика.
4. Други методи:
   • измерване концентрацията на хемоглобина в зависимост от специфичното тегло на кръвта (гравиметричен метод), напр. с помощта на разтвори с различна концентрация на CuSO₄;
   • измерване на хемоглобина по хематокритната стойност;
   • определяне на хемоглобина чрез измерване промяната на електропроводимостта при превръщане на хемоглобина в солно-кисел хематин.
5. Хемиглобинцианиден метод. Еритроцитите се хемолизират и освободеният хемоглобин се окислява от калиев хексацианоферат (III). Полученият метхемоглобин образува с цианидни йони стабилен цветен комплекс, чийто интензитет се измерва като показател за концентрацията на хемоглобин в кръвта. Хемиглобинцианидният метод е метод за измерване на хемоглобин с най-добра аналитична надеждност. Този метод е препоръчан от IСSН като референтен за измерване концентрацията на хемоглобина в кръвта.